③温度和反应时间

使用Tosyl磁珠则要求抗体可以在高温环境中长时间反应而不变性。Tosyl磁珠包被抗体需要在37℃高温条件下长时间反应，推荐的反应时间一般为18-24小时。如果抗体对温度比较敏感，可以在室温条件下进行反应，但需要适当延长反应时间。

在下图37℃和4℃条件反应的对比中可以看出在4℃条件反应24小时，依然不如在37℃反应1小时的反应度。

④封闭过程

由于Tosyl基团本身具有疏水性，如果封闭不充分，Tosyl基团会对血清中的其他组分产生非特异性吸附，从而造成假阳性等问题。下图以CE510封闭剂为例，展示了封闭与否，封闭时间的长短对本底和信噪比的改善。